熒光顯微鏡是光學(xué)顯微鏡的一種,是免疫熒光細胞化學(xué)的基本工具。以紫外線(xiàn)為光源,用以照射被檢物體,使之發(fā)出熒光,然后觀(guān)察物體的形狀及其所在位置。用于研究細胞內物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。
熒光顯微鏡是以紫外光或藍紫單色光激發(fā)標本來(lái)產(chǎn)生熒光,因為紫外光不可見(jiàn),故由標本發(fā)出的熒光與背景反差很大,即熒光顯微鏡通常在黑暗的背景下觀(guān)察彩色的圖像;而普通顯微鏡是在明亮的背景下觀(guān)察較暗的樣品。這樣熒光顯微鏡的對比度比普通顯微鏡提高約100倍,因此可觀(guān)察到普通顯微鏡下看不到的結構細節。熒光顯微鏡具有對比度高這個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn),得到了廣泛的應用。
熒光顯微鏡有兩種不同類(lèi)型:
1.透射式熒光顯微鏡
它和普通光學(xué)顯微鏡類(lèi)似,光源是從鏡座出發(fā)經(jīng)過(guò)聚光鏡到達樣品激發(fā)熒光后通過(guò)物鏡,最后到達目鏡。
2.落射式顯微鏡
大部分的熒光顯微鏡也是采用這種類(lèi)型。它的光源是通過(guò)物鏡落到樣品上,激發(fā)熒光以后再發(fā)射回物鏡,最后到達目鏡。
不論是透射式的熒光顯微鏡還是落射式的,它們的光源都要經(jīng)過(guò)激發(fā)濾色鏡過(guò),濾掉一部分的可見(jiàn)光。激發(fā)樣品發(fā)出熒光后,還要經(jīng)過(guò)阻斷濾色鏡,過(guò)濾掉一部分多余的激發(fā)光。最終,這使得我們觀(guān)察到的是熒光物質(zhì)染色部分所發(fā)出的熒光。